PCR Réaction en chaîne par polymérase

 Réaction en chaîne par polymérase (PCR)

PCR réaction en chaîne par polymérase

Definition polymerase chain reaction

La réaction en chaîne par NJpolymérase est abrégée en PCR. La PCR est une technologie qui réplique des millions de petits morceaux d'ADN que vous voulez. Il a été inventé en 1983 par un scientifique nommé Kary Mullis.

Aujourd'hui, les techniques de biologie moléculaire basées sur la PCR sont largement utilisées en médecine et dans d'autres recherches. Où les maladies sont classées ; Étudier la fonction des gènes; Il est utilisé dans des recherches telles que les tests génétiques.

 Produits chimiques nécessaires à la technologie PCR 

  •  1. Modèles d'ADN
  •  2. Une enzyme appelée ADN polymérase
  •  3. Une courte séquence de nucléotides appelée amorces. (Le n ° 1 construit une amorce basée sur une matrice d'ADN, car l'ADN est un support double, donc l'amorce a deux - avant et arrière)
  •  4. Nucléotides (dNTP ou désoxynucléotide triphosphates) - (bases A, T, G et C requises pour construire un nouveau support d'ADN)
  •  5. Solution tampon (pour créer des conditions optimales pour la réaction PCR)
  •  6. Thermocycleur (machine qui peut régler la température (plusieurs fois))

Etapes de la pcr biologie moléculaire

  •  1. Initialisation : Initialisation : Maintenez la température à 94-96°C pendant 1-10 minutes. Les ADN polymérases sont activées.
  •  2. Dénaturation : le support d'ADN matrice a été réglé à 94-98°C pendant environ une demi-minute (environ 30 secondes) pour séparer les deux supports.
  •  3. Recuit : Des amorces de température adaptée sont appliquées sur le support d'ADN fracturé pour abaisser la température à 50-65°C pendant une demi-minute (environ 30 secondes).
  •  4. Extension / élongation : La température varie en fonction de l'ADN polymérase utilisée. Pour la Taq polymérase, laissez-la à 72°C pendant 1-2 minutes. Cela permet aux nucléotides dNTP de se fixer sur le nouveau support d'ADN.

Une fois que vous avez terminé 2 à 4, vous pouvez terminer une session PCR. Ensuite, le nombre d'ADN a doublé. Fonctionne 2 à 4 30-40 fois.

  •  5. Allongement final : A ce stade, maintenez la température à 70-74°C pendant 5-15 minutes (généralement 72°C). Cela permet de s'assurer que les nucléotides se fixent à l'ADN standard unique pour étendre le support d'ADN.
  •  6. Maintien final : Enfin, les produits de PCR de réaction peuvent être conservés à 4-15°C.

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